@@11@@
Гомеопатия
Одесские крупинки или globuli по-одесски.

Украинский гомеопатический ежегодник: Хроматографические и спектрофотометрические методы анализа гомеопатических матричных настоек Phytolacca и Pulsatilla

~~~ 22-24.XI.18 - ICE-18 - МЕЖДУНАРОДНЫЕ КЁТЕНСКИЕ ЧТЕНИЯ (КЁТЕН, ГЕРМАНИЯ) ~~~ 04.XII.18 – ЕЖЕМЕСЯЧНОЕ ЗАСЕДАНИЕ НМГООО (ОДЕССА, УКРАИНА) ~~~ 06-07.XII.18 – IX МЕЖДУНАРОДНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ «ГОМЕОПАТИЯ В ЛЕЧЕБНОЙ ПРАКТИКЕ" (ВАЛЕНСИЯ, ИСПАНИЯ) ~~~ 18-19.I.19 – МЕЖДУНАРОДНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ CEDH (НИЦЦА, ФРАНЦИЯ) ~~~ 18-20.I.19 – МЕГА-СЕМИНАР «ABC HOMEOPATHY»: Ф. МАСТЕР, Р. ШАНКАРАН, С. САРКАР (ИНДИЯ) ~~~ 25-26.I.19 – 29-Я МЕЖДУНАРОДНАЯ ГОМЕОПАТИЧЕСКАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ (МОСКВА, РФ) ~~~ 27-28.IV.19 – МЕЖДУНАРОДНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ WCHS (ВАНКУВЕР, КАНАДА) ~~~ 30.V-01.VI.19 – МЕЖДУНАРОДНЫЙ КОНГРЕСС «ГОМЕОПАТИЯ И МОРЕ» (ШТРАЛЬЗУНД, ГЕРМАНИЯ) ~~~ 25-28.IX.19 – 74-Й КОНГРЕСС LMHI (СОРРЕНТО, ИТАЛИЯ) ~~~

Поиск:
Гомеопатия - это... Карта сайта Написать письмо врачам Написать письмо в аптеку Правила записи на консультации врачей
Публикации по гомеопатии Периодические профессиональные издания
Международные новости Семинары, конференции, форумы Одесские Гомеопатические Конгрессы
И снова о фаршированной рыбе Объявления для гомеопатов События, даты, поздравления и комментарии Книги и журналы для гомеопатов Новые издания по гомеопатии
Одесское гомеопатическое общество Анкеты консультантов и лекторов Общества
Одесская гомеопатическая аптека История аптеки Номенклатура динамизированных средств Монокомпонентные средства Многокомпонентные динамизированные средства Изготовление гомеопатических лекарств
История гомеопатии в регионе Materia medica Гомеопатия для чайников Вопрос - ответ Дружественные сайты
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ И СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ НАСТОЕК PHYTOLACCA И PULSATILLA

Н.А. Ветютнева, О.А. Москаленко
Украина, Киев

Chromatographic and Spectrophotometry Methods of the Analysis of Homoeopathical MT Phytolacca and Pulsatilla. N.A. Vetjutneva, O.A. Moskalenko (Kyiv, Ukraine)
In given clause the methodological approach to a rating of quality homeopatic matrix tinctures "Phytolacca" and "Pulsatilla" with use chromatographic and spectral of methods of the analysis is covered.

Более 60 % гомеопатических лекарственных средств (ГЛС) изготавливаются из лекарственного растительного сырья (ЛРС), большая часть которого является неофицинальным [2]. Наиболее распространенной "субстанцией", использующейся для изготовления ГЛС, является гомеопатическая матричная настойка (ГМН). Специфика технологического процесса приготовления ГМН заключается в изготовлении их из соков свежих растений, заготовленных в период максимального накопления биологически активных веществ (БАВ) [4].
Однако, ни свежее растение, ни сок, полученный из него, не стандартизуются. Общие методы анализа ГМН в большинстве своем совпадают с методами анализа жидких экстрактов, к которым они близки по своим физико-химическим свойствам.
Ранее нами были обоснованы общие показатели, по которым целесообразно оценивать качество ГМН [3]. Следует отметить, что в Немецкой гомеопатической фармакопее для значительной части ГМН предусматривается тест на подлинность с проведением тонкослойной хроматографии (ТСХ). При анализе хроматограммы, как правило, не указываются действующие вещества, а дается лишь описание хроматограммы с указанием последовательности расположения зон. Иногда используется вещество - стандарт или вещество - маркер, которое не содержится в настойке и занимает центральное положение на хроматограмме. При этом расположение зон ГМН описывается по отношению к маркеру [6].
Целью наших исследований является изучение возможности идентификации ГМН по качественному составу основных групп БАВ, с помощью таких специфических методов анализа как ТСХ и спектрофотометрия в УФ - и ИК - областях спектра.
Объекты и методы исследования
Объектами исследования служили ГМН Pulsatilla и Phytolacca, приготовленные из свежего сырья растений Прострел луговой (Pulsatilla pratensis, семейство Лютиковые) и Лаконос американский (Phytolacca americana, семейство Лаконосовые). Приготовление эссенций проводили в строгом соответствии с технологическим предписанием ( §1,§3) приготовления ГЛС [4].
Хроматографические исследования проводили на бумаге для хроматографирования марки "Filtrak-FN-1". В работе использовали следующие системы растворителей для хроматографирования :
ГМН Phytolacca и Pulsatilla:
Система № 1 - хлороформ - метанол - вода (65:30:10)
№ 2 - бензол - кислота уксусная - вода (125:72:3)
№ 3 - кислота уксусная - кислота хлористоводородная - вода (30:3:10)
ГМН Pulsatilla:
Система № 4 - 15% кислота уксусная
№ 5 - н-бутанол - кислота уксусная - вода (4:1:5)
ГМН Phytolacca:
Система № 6 - хлороформ - ацетон - кислота уксусная (83:15:2)
№ 7 - хлороформ - метанол (3:1)
№ 8 - н-бутанол - этанол - 25 % раствор аммиака (7:2:5)
№ 9 - этанол - метанол - вода (100:40:35)
Соотношения растворителей, указанные цифрами, брали по объему. Способ хроматографирования - восходящий. Хроматографирование в системах № 4 и № 5 проводили методом двумерной хроматографии, при этом около 0,1 мл ГМН Pulsatilla наносили на лист хроматографиче-ской бумаги размером 40x40 см и разгоняли пятно восходящим способом. В одном исследовании использовалась система № 4 в двух направлениях, а в другом случае система № 4 - первое направление, система № 5 - второе направление.
Все значения Rf являются средними величинами двух определений.
Готовые хроматограмы высушивали на воздухе, наблюдали в дневном, УФ - свете без проявления, и при обработке парами аммиака, 5 % спиртовым раствором алюминия хлорида с последующим выдерживанием в сушильном шкафу при температуре 100-105°С в течение 2-3 минут (№ 3). Полученные хроматографические пятна в системах №3, №4,№5,№7 элюировали 45 % этиловым спиртом и проводили качественные реакции на основные группы БАВ.
Хроматографические исследования в тонком слое сорбента (ТСХ) проводили с использованием пластинок "Silufol UV-254", восходящим способом в системах растворителей №1, №5, №10 - метанол - хлороформ (11:89) (Pulsatilla, Phytolacca), №6, №7, №8, №9 (Phytolacca), №11 -этилацетат - метанол - вода (10:2:1), №12 - бензол - этилацетат (75:25) (Pulsatilla).
Хроматограммы высушивали на воздухе, наблюдали в УФ свете без проявления и при обработке парами аммиака, 20% раствором кислоты серной с последующим выдерживанием в сушильном шкафу при температуре 110°С в течение 10 минут (№1,№11), 1 % спиртовым раствором калия гидроксида с последующим высушиванием на воздухе (№8,№9), 5 % спиртовым раствором алюминия хлорида по методике, указанной выше (№11).
Спектры поглощения ГМН в УФ области регистрировали на спектрометре "Perkin - Elmer Lambda 14 (1,3)" в кювете с толщиной слоя 1 см в области длин волн 220-400 нм. В качестве растворов сравнения использовали 45 % и 60 % этиловый спирт. При этом ГМН Pulsatilla разбавляли 60 % этиловым спиртом в 250 раз, ГМН Phytolacca разбавляли 45% этиловым спиртом в 50 раз.
ИК-спектр ГМН в таблетке калия бромида в области 4000-400 см"1 регистрировали на приборе марки "Perkin-Elmer-325". Методика приготовления образца для записи ИК- спектра была следующей: 5мл ГМН помещали в выпарительную чашку, высушивали в сушильном шкафу при температуре 100-105°С в течение 45 мин., затем выдерживали в эксикаторе 1 час. Далее поступали как описано в ГФ XI издания [5].
Результаты и их обсуждение
Необходимым условием оценки качества ГМН является идентификация основных групп БАВ. ЛРС, которое мы использовали в своих исследованиях, не является официальным. По литературным данным виды растений рода Pulsatilla и Phytolacca содержат тритерпеновые сапонины [1,10]. Помимо сапонинов в надземной части пяти исследованных видов рода Pulsatilla обнаружено четыре флавоноида, два из которых идентифицированы как кверцетин и кемпферол [7].Предварительно проведенные качественные реакции на группы БАВ показали на присутствие в ГМН Pulsatilla флавоноидов, относящихся к подгруппе изофлавоноиды (реакция с железа (III) хлоридом и гексацианоферратом калия) [3]. Помимо тритерпеновых сапонинов в ЛРС Лаконоса американского присутствует алкалоид фитоляккцин, эфирные масла и сахара (глюкоза, фруктоза) [1,10]. Немецкая гомеопатическая фармакопея для идентификации тритерпеновых сапонинов Phytolacca americana предлагает реакцию пенообразования и реакцию гемолиза эритроцитов в геле кровяной суспензии. Сахара идентифицируются по реакции с 1 % раствором резорцина в кислоте хлористоводородной [9]. Помимо этого предлагается метод ТСХ в системе №6, но без предварительного выделения сапонинов, обнаружить их в ГМН не удаётся.
Для идентификации тритерпеновых сапонинов в ГМН Phytolacca, наряду с вышеперечисленными реакциями,использовали реакцию с уксусным ангидридом и кислотой серной концентрированной [3]. Для выделения тритерпеновых сапонинов методом ТСХ предлагаются системы №1, №7, №8. Результаты представлены в таблице 1.
Таблица 1. Результаты хроматографического исследования гомеопатической матричной настойки Phytolacca
Система HRf Идентификация
1 2 3
№1 hRf=45 Зеленое флюоресцирующее пятно на старте с фиолетовой флюоресцирующей свечой (до 6 см). Центральное пятно в свече - с более выраженной фиолетовой флюоресценцией. После обработки 20 % раствором H2SO4 и нагревания - буровато-коричневый цвет (ТСХ).
№7 HRf(A)=18
hRf(B)=37
hRffCf=50
Три пятна (А,В,С) с голубой флюоресценцией . После обработки парами аммиака флюоресценция стала светло-голубой (ТСХ).
№7 0,0 Голубое флюоресцирующее пятно на старте с голубой флюоресцирующей свечой (элюировали 45% этиловым спиртом). Элюат даёт положительную реакцию на тритерпеновые сапонины, (бумажная)
№8 HRf(A)=39
hRf(B)=76
hRf(c)=86
Три пятна (А,В,С) с голубой флюоресценцией . После обработки парами аммиака флюоресценция стала светло-голубой. После обработки 1% спиртовым раствором калия гидроксида пятна А и В приобрели жёлто - зелёную флюоресценцию (ТСХ)
Хроматографическая бумага, смоченная ГМН Phytolacca, имеет в УФ-свете голубую флюоресценцию. Помимо этого изменение цвета флюоресценции после обработки 1 % спиртовым раствором калия гидроксида говорит о возможном присутствии в ГМН соединений, относщихся к группе кумаринов.
Для идентификации флавоноидов и тритерпеновых сапонинов ГМН Pulsatilla предлагаются системы №1, №5, №12 (система предложена Э. Шталем для выделения изофлавоноидов) [8], двумерная хроматография в системе №4. Результаты приведены в таблице 2.
Таблица 2. Результаты хроматографического исследования гомеопатической матричной настойки Pulsatilla
Система hRf Идентификация
№1 hRf(A)=38
hRf(B)=95
Зеленое флюоресцирующее пятно на старте с фиолетовой флюоресцирующей свечой (до 2 см). После обработки парами аммиака проявились два пятна А и В с голубой флюоресценцией. После обработки 20 % раствором H2SO4 и нагревания пятно А стало буровато-коричневого цвета (ТСХ).
№4 двумерная hRf1(A)=25
hRf2{A)=19
hRf1(B)=100
hRf2fBy=64
Пятно А с желто - зеленой флюоресценцией и пятно В с голубой. Пятна элюировали 45% этиловым спиртом. Элюат А - положительная реакция на тритерпеновые сапонины, элюат В - на изо-флавоноиды.(бумажная)
№5 hRf(A)=86 Голубая флюоресцирующая свеча (до 10 см), пятно А с синей флюоресценцией (элюировали 45% этиловым спиртом). Элюат свечи - положительная реакция на тритерпеновые сапонины, элюат пятна - на изофлавоноиды. (бумажная)
№12 hRf(A)=9 Желто - зеленое флюоресцирующее пятно на старте. Пятно А -голубая флюоресценция. После обработки парами аммиака - зеленовато - голубая (ТСХ).
Таким образом, проведенный нами хроматографический анализ подтверждает наличие в ГМН Phytolacca тритерпеновых сапонинов и предварительно соединений кумаринового ряда, а в ГМН Pulsatilla- тритерпеновых сапонинов и изофлавоноидов.
Для подтверждения данного вывода мы использовали спектральные методы анализа. УФ -спектр поглощения ГМН Phytolacca имеет плечо в области 254 - 266нм, что указывает на присутствие тритерпеновых сапонинов. УФ - спектр поглощения ГМН Pulsatilla характеризуется максимумом при длине волны 260,5 нм и плечом при 310-320 нм, что указывает на наличие изофлавоноидов и тритерпеновых сапонинов (рис. 1). Изучение ИК - спектра образца ГМН Pulsatilla показало отсутствие характеристического максимума поглощения, а ИК - спектр ГМН Phytolacca имеет максимумы поглощения в области 1370см' , 1450см"1, 1685см"1, 1725см"1, 1990см"1.
Учитывая вышеизложенное, можно сказать, что проведенные исследования могут быть положены в основу проведения испытаний на идентичность ГМН, и являются теоретической базой для разработки показателей качества активного "ингредиента" ГЛС.
Вывод
Для идентификации БАВ ГМН Pulsatilla и Phytolacca целесообразно использовать метод ТСХ и спектральные методы анализа. Оптимальными системами растворителей для идентификации основных групп БАВ являются: хлороформ - метанол - вода (65:30:10), 15 % кислота уксусная, бензол - этилацетат (75:25) - ГМН Pulsatilla; хлороформ - метанол - вода (65:30:10), хлороформ - метанол (3:1) - ГМН Phytolacca. УФ - спектр поглощения ГМН Pulsatilla характеризуется максимумом при длине волны 260,5 и плечом при 310 - 320 нм; УФ - спектр поглощения ГМН "Phytolacca" имеет плечо при длине волны 254 - 266 нм. ИК - спектр ГМН Phytolacca характеризуется максимумами поглощения в области 1370см"1, 1450см"1, 1685см"!, 1725см"1, 1990см"1.

ЛИТЕРАТУРА:
1. Вавилова Н.М. Гомеопатическая фармакодинамика. - М.: Эверест, 1994. - т. 1-507с;
2. Ветютнева Н.А., Москаленко Н.Д., Москаленко О.А., Пилипенко А.Г. Общие методы анализа и систематизации гомеопатического растительного сырья по технологическим подходам при изготовлении матричных настоек: Методические рекомендации. - Киев, 1996.-35с.
3. Ветютнева Н.А., Москаленко О.А. Изучение физико-химических свойств гомеопатической матричной настойки Pulsatilla. // Збірн. наук, праць співробітн. КМАПО ім. П.Л. Шупика; Вип. 8- Київ, 1999. - С. 525-533.
4. Гомеопатические лекарственные средства. Руководство по описанию и изготовлению гомео патических лекарств /Под ред. В.И. Рыбака. Пер. с нем. - М.: Московское научное общество врачей гомеопатов. - 1967. -371 с.
5. Государственная фармакопея СССР: Вып 1. Общие методы анализа / МЗ СССР.- 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987 - 336 с.
6. Костенникова З.П., Акашкина Л.В. Подготовка Государственной гомеопатической фармако пеи России // Мат. Междунар. гомеопатич. конг.: "Гомеопатия в России". - Новосибирск, 1996.-€.104-105.
7. Уланова К.П., Кривощекова О.Е. Фитохимическое исследование дальневосточных родов Pulsatilla и Clematis // Мат. Всесоюзной конф.: "Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока". - Томск, 1986. - С.136
8. Шталь Э. Хроматография в тонких слоях. - М.: Мир, 1965. - 508 с.
9. German Homoeopathic pharmacopoeia.- 5-th Suppl. - British Homeopathic Association. - 1991. - 401 p.
10. Homoeopathic Repetitorium (Published by Dr. Willmar Schwabe). - Karlsruhe, 1994. -110 p.


 

Украинский гомеопатический ежегодник: Хроматографические и спектрофотометрические методы анализа гомеопатических матричных настоек Phytolacca и Pulsatilla
Гомеопатические книги и книги по гомеопатии.



© 2003-2018



Рейтинг Mail.ru
Каталог@Mail.ru - каталог ресурсов интернет


Яндекс цитирования

Украина онлайн
УКРМЕД - Каталог Медичних Сайтiв в Українi Meddesk.ru - медицинская доска объявлений. Обмен ссылками.